知識問(wèn)答：ELISA常見(jiàn)問(wèn)題解答

　　知識問(wèn)答：ELISA常見(jiàn)問(wèn)題解答

1、試劑盒從冰箱拿出后未充分平衡室溫，會(huì )有什么影響?

如果試劑盒從冰箱中拿出后未充分平衡至室溫(20～25℃)，可能會(huì )導致溫育時(shí)間不夠，從而使OD值偏低。

2.、移液器吸液量不足或吸頭內壁不清潔，會(huì )造成什么后果?

移液器吸液量不足或吸頭內壁不清潔，都可能導致加樣量不足，造成OD值偏低。此外，吸頭內壁不清潔還可能導致非特異性吸附，進(jìn)一步影響實(shí)驗結果。

3、操作順序顛倒或遺漏步驟，會(huì )有什么后果?

如果操作順序顛倒或遺漏步驟，很可能導致實(shí)驗失敗，例如漏加酶結合物、顯色劑等，使整塊ELISA板都不顯色。

4、溫育時(shí)間不夠或溫育溫度未達到要求，會(huì )有什么影響?

溫育時(shí)間不夠或溫育溫度未達到要求，都會(huì )影響反應的進(jìn)行，導致OD值偏低。例如，保溫用的濕盒沒(méi)有預溫，或培養箱溫度不符合操作要求等。

5、洗板液在配置過(guò)程中出現問(wèn)題，會(huì )造成什么后果?

洗板液在配置過(guò)程中出現問(wèn)題，如量筒不干凈、含有酶抑制物、濃度過(guò)高等，都可能導致洗去特異性結合物，使OD值偏低。

6、洗板時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過(guò)長(cháng)、洗板次數過(guò)多，會(huì )有什么影響?

這些操作都可能導致洗去結合在包被板的特異性結合物，從而使OD值偏低。

7、加完終止液后沒(méi)有輕輕充分混勻ELISA板液就立即讀數或放置太久才進(jìn)行讀數，會(huì )有什么影響?

這可能導致檢測OD值偏低或偏高。一般建議在加完終止液后3分鐘之內進(jìn)行讀數。

8、酶標儀檢測波長(cháng)設定有誤，會(huì )有什么后果?

如果酶標儀檢測波長(cháng)設定有誤，例如選用的波長(cháng)不是產(chǎn)物的敏感吸收峰，可能會(huì )導致OD值偏低或偏高。

9、陰性對照出現陽(yáng)性結果，可能的原因是什么?

陰性對照出現陽(yáng)性結果可能是由于樣品、試劑被污染，或加樣時(shí)操作不當導致相鄰孔之間溶液濺灑出現交叉污染。此外，抗體量過(guò)多導致非特異性結合也可能是一個(gè)原因。

10、酶標板整體背景高，可能的原因是什么?

酶標板整體背景高可能是由于底物孵育過(guò)程沒(méi)有避光，導致背景信號增強。

11、復孔之間重復性差，可能的原因是什么?

復孔之間重復性差可能是由于加樣本及試劑量不準、孔間不一致等原因造成的。此外，操作條件、人員等的不一致也可能導致重復性差。

12、陽(yáng)性對照值偏低或低吸光度，可能的原因是什么?

陽(yáng)性對照值偏低或低吸光度可能是由于溫育的時(shí)間或溫度不夠、顯色反應時(shí)間太短、顯色液變質(zhì)或試劑過(guò)期、試劑稀釋有誤等原因造成的。

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