知識問(wèn)答：ELISA中常見(jiàn)的假陰性的因素

　　ELISA中常見(jiàn)的假陰性的因素

在ELISA實(shí)驗中，假陰性的常見(jiàn)原因主要包括內源性因素、外源性因素、操作因素和試劑盒自身因素。為了減少假陰性的發(fā)生，需要從多個(gè)方面進(jìn)行預防和解決。

內源性因素

基因突變：個(gè)別個(gè)體的基因突變可能導致檢測結果為假陰性，尤其是當檢測用抗體的結合位點(diǎn)在突變區時(shí)。

待檢物含量偏低：樣本內被測物的濃度較低，易造成假陰性結果，如某些疾病發(fā)展初期被檢物濃度低于檢測限。

外源性因素

樣品反復凍融：血清樣品的反復凍融會(huì )使血清中的抗體效價(jià)下降，造成假陰性出現。

樣品處理不當：標本用肝素或EDTA等抗凝劑處理，高濃度肝素具有強大的負電荷，能吸附酶標記物不易洗脫，導致假陰性結果。

樣品存放不當：標本放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現假陰性。

操作因素

加樣不準確：樣品稀釋液多加或血清少加，會(huì )降低血清中待檢IgG的吸附性，導致假陰性結果。

洗滌不當：洗滌條件一致性較差或洗滌機使用不當，血清中殘留的纖維蛋白絲或洗滌液析出的結晶易造成“花板”，導致假陽(yáng)性或假陰性。

孵育問(wèn)題：溫箱調溫器異常使溫箱溫度降低或孵育時(shí)反復打開(kāi)溫箱門(mén)，造成孵育時(shí)反應不充分，出現假陽(yáng)性結果。

試劑盒自身因素

試劑盒敏感性：某些廠(chǎng)家為了提高檢測的特異性，會(huì )降低試劑盒的敏感性，從而造成在檢測過(guò)程中假陰性的出現。

為了減少ELISA實(shí)驗中的假陰性，需要從標本采集、處理、保存到實(shí)驗操作和試劑盒選擇等多個(gè)環(huán)節進(jìn)行嚴格控制和管理。這包括優(yōu)化標本處理流程、提高操作一致性、選擇高質(zhì)量的試劑盒等措施。通過(guò)這些措施，可以有效降低ELISA實(shí)驗中假陰性的發(fā)生率，提高實(shí)驗結果的準確性和可靠性。x

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