本生大課堂——ELISA實(shí)驗可能出現的問(wèn)題及原因分析

　　本生大課堂——ELISA實(shí)驗可能出現的問(wèn)題及原因分析

　　1.應該注意試劑4°c冷藏時(shí)水化層形成，蛋白分子分布異常;

　　2.標本由于冷藏時(shí)Ig G聚合成多聚體，Fib非特異性吸附，反復凍融機械切力致使蛋白分子受損;

　　3.加樣時(shí)不準，槍頭吸樣時(shí)插入樣本液面下2mm為宜;

　　4.常采用的溫度有43、37°c、室溫、或者4°c等。37°c常用，4°c效果好，但孵育時(shí)間有異;

　　5.要注意內源如風(fēng)濕因子，補體，高濃度非特異性免疫球蛋白，異嗜性抗體及某些自身抗體等;外源如標本溶血，細菌污染，儲存時(shí)間過(guò)長(cháng)及凝固等因素影響。

　　6、在使用ELISA試劑盒時(shí)應注意：2-8℃保存(特殊情況除外)、同一品種不同批號試劑不能混用、不同品種試劑盒顯色劑不能混用。

　　常見(jiàn)問(wèn)題及分析

　　1、陽(yáng)性對照不顯色

　　漏加陽(yáng)性對照

　　陽(yáng)性對照孔忘加酶或忘加顯色劑

　　陽(yáng)性對照受污染

　　2、陽(yáng)性對照顯色淺(HBeAb HBcAb陰性對照顯色淺)

　　試劑和保存不當、活性下降

　　在使用前試劑盒未放置在室溫平衡

　　溫育時(shí)間不夠或孵育溫度過(guò)低

　　洗板浸泡時(shí)間過(guò)長(cháng)、洗板次數過(guò)多

　　使用不正確的洗液

　　洗液中含有防腐劑同時(shí)殘留量過(guò)多

　　洗板后酶標板被干透

　　讀數時(shí)使用波長(cháng)不正確

　　濾光片不清潔或濾光片位置錯誤

　　讀數時(shí)酶標板放置位置錯誤

　　陽(yáng)性對照活性下降

　　酶標失活

　　3、陰性對照顯色(HBeAb、HBcAB除外)

　　實(shí)驗過(guò)程受污染

　　陰性對照污染

　　酶滴在孔壁上

　　4、整板不顯色

　　試劑和保存不當、已經(jīng)失活

　　忘記加酶、可檢查滴瓶?jì)让噶?/p>

　　忘記加抗原或中和試劑

　　忘記加顯色劑A或顯色劑B

　　5、陽(yáng)性對照讀數不正常

　　加入標本后未進(jìn)行必要的混勻

　　標本稀釋錯誤

　　加樣量不正確

　　冷凍標本未溶解混勻

　　標本中含有防腐劑

　　6、血清本底高

　　試劑盒靈敏度高

　　加樣時(shí)使用同一槍頭、交叉污染

　　孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)或溫度過(guò)高

　　洗板次數不足，浸泡時(shí)間短

　　洗板時(shí)洗液量少或殘留量多

　　洗板時(shí)洗液量過(guò)多、串孔

　　洗板機管道中有霉菌生長(cháng)

　　洗液瓶混用

　　洗板機洗板頭阻塞或洗板機洗板頭位置錯誤

　　配置洗液的去離子水或蒸餾水被污染

　　終止液濃度不夠，沒(méi)有充分混勻，或終止液被污染

　　讀數時(shí)酶標板底部有水蒸氣凝結

　　酶標儀偏差

　　7、假陽(yáng)性結果

　　實(shí)驗器具被污染

　　血清中出現纖維蛋白凝集

　　血清標本中出現過(guò)多的紅細胞

　　血漿標本處理不當

　　標本中含有灰塵、顆?；蚣毦?/p>

　　標本被反復凍融

　　加標本后進(jìn)行不正確的振蕩

　　沿孔壁上加入標本，加樣后出現過(guò)多的氣泡

　　酶標滴加在孔壁上，洗板未洗凈

　　混用洗液或洗液稀釋錯誤

　　洗液瓶中、管道或配置洗液的水中有霉菌

　　洗板次數不足或浸泡時(shí)間短

　　洗板時(shí)洗液量少或殘留量多

　　洗板時(shí)洗液量過(guò)多、串孔

　　讀數時(shí)酶標板底部有水蒸氣凝結

　　洗液瓶、廢液瓶混用

　　讀數過(guò)程中板孔中有氣泡

　　酶標儀偏差

　　8、同一板內重復性差

　　標本混勻不充分

　　試劑混勻不充分

　　標本與酶結合物混勻不充分

　　加樣技術(shù)差異

　　加樣器故障或加樣器被污染

　　加樣時(shí)間過(guò)長(cháng)導致孵育時(shí)間不同

　　孵育器內部的溫度不一致，造成酶標板孔間的孵育溫度差異

　　讀數時(shí)酶標板孔間有氣泡

　　9、HCV血清本底高

　　靈敏度高

　　樣本稀釋液加液量不足100ul

　　槍頭深入血清過(guò)深，致使外壁沾有血清導致加樣偏多(>10ul)

　　同一孔加了兩次樣本

　　其他可能原因參考HBsAg

　　10、HIV陽(yáng)性對照低

　　誤將陽(yáng)性對照稀釋

　　陽(yáng)性對照未混勻

　　加液量不足

　　其他可能原因參考HBsAg

　　ELISA實(shí)驗 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng)，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng )美好的未來(lái)。